磷酸化作用-多肽修饰
磷酸化影响着细胞生命的方方面面。蛋白激酶通过调节信号通路和细胞进程，影响胞内通信功能的每一方面。然而异常的磷酸化也是引起诸多疾病的起因。尤其是突变的蛋白激酶、磷酸酶可导致许多紊乱。很多天然毒素和病原体也是通过改变胞内蛋白的磷酸化状态来发挥它们的影响。
丝氨酸（Ser）、苏氨酸（Thr）和酪氨酸（Tyr）的磷酸化作用是一个可逆的蛋白修饰过程，它们参与调节无数的细胞活动，如受体信号转导、蛋白质缔合与分割、激活或抑制蛋白功能，甚至细胞的存活等。磷酸盐是带负电的(每一个磷酸基携带两个负电荷)。因此，他们的加入会改变蛋白属性，这种变化通常是构象变化，引起蛋白质改变它的构造方式。当磷酸基团被去除时，蛋白质构象又会恢复至原始状态。如果这两种构象的蛋白质表现出不同的活性，那,磷酸化可以作为此蛋白控制其活性的分子开关。
许多激素均是通过提高丝氨酸（Ser）或苏氨酸（Thr）残基的磷酸化状态来调节特异性酶的活性。生长因子（如胰岛素）可以触发酪氨酸（Tyr）的磷酸化作用。这些氨基酸的磷酸基团是可以迅速地被去掉的，因此，Ser、Thr和Tyr的功能在调控细胞活动的过程（如肿瘤扩散）中起到分子开关的作用。
合成肽在研究蛋白激酶底物以及相互作用的领域起着非常有用的作用。但目前一些因素阻碍或限制了磷酸化多肽合成技术的适应性，如无法实现固相合成全自动化、缺乏与标准分析平台之间的便利连接等。泽溪源基于PeptideSynTM 平台的多肽合成及磷酸化修饰技术克服了这些限制，同时提高了的合成效率也显示了它的可扩展性。PeptideSynTM 平台非常适合于蛋白激酶底物、抗原、结合分子和抑制剂的研究。
- 我们提供pSer、pTyr、pThr和D-pSer、D-pTyr、D-pThr的磷酸化修饰服务。
- 可同时进行2个位点、3个位点、4个位点、5个位点的磷酸化修饰，如：NDEpSpTDYEpSERQpTD。
成功案例：固相合成带有4个磷酸化位点的多肽
14aa的多肽（MW：1981.53），4个磷酸化位点（xxxpSpTxxxpSxxxpTx），纯度为95%，完成周期为3周。
HPLC Results:
MS Results:
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检测蛋白质磷酸化的方法集锦
Radiolabel学者的研究表明在真核细胞中大约30%的蛋白会经受磷酸化作用。一个经典的检测蛋白磷酸化的方法是，二维凝胶电泳或细胞经放射性标记32p-正磷酸盐孵育，提取细胞裂解液，经SDS-PAGE作蛋白分离，,然后暴光于胶片。这些方法不仅需要大量人力，而且需用到放射性同位素。以下简述了几种目前用于检测磷酸化的方法。
- 激酶活性检测
在体外，激酶活性的检测是将经免疫沉淀法获得的蛋白激酶与某一底物在ATP环境下共同孵育，然后再检测。磷酸化底物的测量可以通过报告系统如比色法、放射性或荧光检测而得。
- 磷酸化特定性抗体的开发
磷酸化抗体已被许多研究者使用。泽溪源为研究人员开发了许多磷酸化特异性抗体。首先合成磷酸化多肽，即围绕靶蛋白磷酸化位点的氨基酸序列，接着共轭偶联至血蓝蛋白(KLH)上进行免疫。免疫血清将流经多肽亲和层析柱，从而得到一个非常特异的免疫制剂。检测的成功与否取决于抗体对靶磷酸化蛋白的特异性和亲和力。
- 免疫印迹（Western Blot）
许多磷酸化抗体是十分敏感的，可以很容易地检测到常规样品中的磷酸化蛋白。化学发光和比色法都是较常见的检测方法，蛋白Markers通常用来为蛋白质量提供标准。
- 酶联免疫吸附试验(ELISA)
ELISAs提供一种间接测量激酶活性的方法，其比WB更容易定量。磷酸化特异的ELISA技术可以很轻易地通过使用一个校准标准来量化结果。通过双抗体夹心方法，应用两个靶蛋白的特异性抗体可使检测呈现高特异性。此外,基于微孔板的ELISAs检测，更是具有高通量、微量和对低丰度蛋白检测的特点。
- 细胞ELISA（Cell-Based ELISA）
通过分析完整的细胞中磷酸化蛋白，可更准确地反应特性的信号网络状态。一般磷酸化抗体多通过荧光或比色法来检测磷酸化状态。
- 流式细胞术(FCM)和ICC / IHC
流式细胞术因其快速、定量、单细胞分析等特点而非常具有优势。细胞被诱导后，通过甲醛或多聚甲醛将其与磷酸化蛋白交联固定，然后分析。固定的细胞需经通透处理，以便磷酸化抗体的进入。
- 质谱分析（Mass Spectrometry）
质谱(MS)技术是一项用于识别磷酸化蛋白、磷酸化多肽和磷酸化残基序列的便利工具。利用MS卓越的灵敏度和分辨率，可识别某一单个蛋白质或多肽。但来自磷酸化多肽的信号通常较弱，因而新的技术正在被研发以增强MS信号。这些策略包括固化金属亲和层析，磷酸化抗体的丰富，化学修饰方法和用生物素部份置换磷酸基团。
- xMAP(flexible Multi-Analyte Profiling) 技术
Multi-Analyte profiling技术涉及磷酸化抗体的应用和基于微孔板及膜的检测方式。这些检测技术可提供大量的数据，却只需极少量的样本。然而，这些检测技术并不比传统的检测方法敏感，原因在于潜在的抗体交叉反应。
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